На самцах мышей ICR (CD-1) проведена оценка радиозащитной эффективности применения гранулоцитарного колониостимулирующего фактора в форме пэгфилграстима при фракционированном облучении. Мышей подвергали пяти ежедневным воздействиям рентгеновским излучением в дозе 2.5 Гр. Через 3 ч после каждого облучения подкожно вводили мышам пэгфилграстим в дозировке 0.5 мкг/г. Также препарат вводили ежедневно через 3–7 суток после последнего облучения. Оценку эффективности данной терапевтической схемы проводили на основании степени повреждений ДНК клеток селезенки, изученной методом ДНК-комет, через 30 мин после последнего облучения, гематологических показателей – через 30 мин и через 3 суток, оснований Шиффа, триеновых и оксодиеновых конъюгатов в печени – через 30 мин, массы тимуса и селезенки, числа кариоцитов в бедренной кости, содержания тиобарбитурат-реактивных продуктов в печени – через 3 суток, а также на основании 30-суточной выживаемости. Применение изучаемой терапевтической схемы способствовало существенной коррекции вызванного облучением окислительного стресса: по критериям содержания оснований Шиффа, триеновых и оксодиеновых конъюгатов группа, получавшая пэгфилграстим, соответствовала интактным мышам, содержание тиобарбитурат-реактивных продуктов в печени снизилось относительно облученного контроля, но показатели интактных мышей не достигнуты. Введение пэгфилграстима не скомпенсировало вызванную облучением гибель клеток костного мозга через 3 суток после последнего облучения и смогло в конечном итоге обеспечить выживание только 3 мышей из 14 особей, получавших препарат. Таким образом, для эффективного применения пэгфилграстима во время фракционированного облучения при суммарной дозе 12.5 Гр необходимо увеличить число сеансов облучения со снижением дозы каждого сеанса, либо снизить общую дозу излучения. Также перспективным представляется совместное применение пэгфилграстима с другими радиозащитными препаратами с иными механизмами действия.
Окислительный стресс является ключевым звеном в развитии многих патологических процессов. Для его оценки широко применяются флуоресцентные красители, чувствительные к активным формам кислорода, в частности дихлорфлуоресцени и его производные. Эти красители активно используются при работе с культурами клеток, однако данных об их применении для анализа клеток, выделенных непосредственно из тканей животных, крайне мало. В настоящем исследовании изучалась возможность использования 6-карбокси-2',7'-дихлорфлуоресцения для регистрации окислительного стресса в клетках, выделенных из кожных лоскутов крыс. Для индукции активных форм кислорода фрагменты кожи были инкубированы в среде с перекисью водорода, после чего из них готовили клеточные суспензии. Клетки окрашивали 6-карбокси-2',7'-дихлорфлуоресцением и Hoechst 33342, что позволяло нормировать флуоресцентный сигнал по числу клеток в пробе. В отдельных экспериментах предшественник 6-карбокси-2',7'-дихлорфлуоресцения вводился внутрикожно живым животным. Оценка соотношения флуоресценции 6-карбокси-2',7'-дихлорфлуоресцения и Hoechst 33342 показала возможность регистрации только выраженного окислительного стресса, в то время как различать его степень или фиксировать низкоинтенсивные изменения не удалось. Дополнительно микроскопический анализ выявил наличие клеточных агрегатов и фрагментов межклеточного матрикса, что снижало достоверность результатов. Полученные данные указывают на ограниченность метода окрашивания клеток кожи производимым дихлорфлуоресцения для оценки интенсивности окислительного стресса в нативной ткани.
Индексирование
Scopus
Crossref
Higher Attestation Commission
At the Ministry of Education and Science of the Russian Federation